據(jù)報道，每年因劣質(zhì)抗體造成的生物和醫(yī)學(xué)研究損失約為8億美元。此外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致和抗體重復(fù)性差的后果 是無法估計(jì)的。

國際抗體驗(yàn)證工作組（IWGAV）于2016年9月發(fā)表題為《 自然方法 中 抗體驗(yàn)證的建議》的文章 ，強(qiáng)調(diào)抗體驗(yàn)證應(yīng)根據(jù)目標(biāo)蛋白的相應(yīng)應(yīng)用和背景進(jìn)行。作者提出了抗體驗(yàn)證的五個概念支柱：（i）遺傳策略，（ii）正交策略，（iii）獨(dú)立抗體策略，（iv）標(biāo)記蛋白的表達(dá)，以及（v）免疫捕獲后進(jìn)行質(zhì)譜分析。多發(fā)性硬化癥）。

這五種方法各有其優(yōu)缺點(diǎn)以及適用條件。例如，遺傳策略通過比較細(xì)胞或組織中的相關(guān)信號來評估抗體特異性，其中使用 CRISPR-Cas9 或 RNA 干擾 (RNAi) 敲除或敲低目標(biāo)基因與野生型 (WT) 對照的信號。盡管這種方法很簡單，但未能擊倒或敲除目標(biāo)基因?qū)⒋蟠髶p害該方法的實(shí)驗(yàn)可行性。

免疫捕獲后進(jìn)行質(zhì)譜 (MS) 的方法可以識別與純化抗體直接相互作用的蛋白質(zhì)， 以及與目標(biāo)蛋白質(zhì)間接相互作用的其他蛋白質(zhì)。 然而，這種方法依賴于昂貴的科學(xué)儀器和實(shí)驗(yàn)材料。并非每個實(shí)驗(yàn)室都能負(fù)擔(dān)得起這些設(shè)備。

在 Affinity Biotech，抗體通過 獨(dú)立抗體驗(yàn)證進(jìn)行驗(yàn)證。為此，使用幾種抗體來識別靶蛋白上的不同表位。具有最高特異性的抗體是通過包括比較和定量分析的適當(dāng)程序確定的。雖然大多數(shù)抗體的檢測應(yīng)該沒有問題，但對于檢測特異性要求較高的抗體，特別是那些位點(diǎn)特異性的磷酸化抗體，仍然不夠。

結(jié)合多年的抗體研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，Affinity Biotech采用了更合適的抗體驗(yàn)證策略： 封閉 肽驗(yàn)證。

封閉肽(抗原)與抗體一一對應(yīng)。 。這是最原始的材料，只有原廠才能提供。

首先，我們對封閉肽進(jìn)行 MS 分析，以確保肽序列準(zhǔn)確。

在蛋白質(zhì)印跡分析中，肽會阻斷目標(biāo)抗體的信號。沒有封閉肽的泳道用作對照。封閉肽將與靶蛋白競爭結(jié)合位點(diǎn)，從而在封閉基團(tuán)中不留下特異性條帶。

該策略目前用于驗(yàn)證我們的抗體。它對于磷抗體的生產(chǎn)至關(guān)重要，因?yàn)樗_保了磷抗體的位點(diǎn)特異性。換句話說，磷酸化抗體只能識別相應(yīng)位點(diǎn)的磷酸化靶蛋白。非磷酸化的目標(biāo)蛋白或其他位點(diǎn)磷酸化的目標(biāo)蛋白將不會被識別。

舉個例子。在 Phospho-MSK1 (Ser211) Antibody（貨號 AF7155）的蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證中，泳道 1 和泳道 3 中分別添加了非磷酸化阻斷肽和磷酸化阻斷肽。 2號車道沒有被封閉。結(jié)果顯示，使用磷酸化肽封閉目標(biāo)蛋白后，沒有檢測到目的條帶。