cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細胞試劑盒

cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細胞試劑盒

概述：磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測能夠檢測組蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化，組蛋白 H3 是基因表達和有絲分裂的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Ser10 的磷酸化與有絲分裂和減數(shù)分裂期間的染色體濃縮密切相關(guān)。

磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測可測量在 Ser10 位點磷酸化的組蛋白 H3。與 Western Blot 不同，該檢測基于平板，不需要凝膠、電泳或轉(zhuǎn)移。磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測使用 2 種標記抗體：一種帶有供體熒光團，另一種帶有受體。選擇第一種抗體是因為它能特異性結(jié)合蛋白質(zhì)上的磷酸化基序，第二種是因為它能夠獨立于蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)識別蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)磷酸化能夠形成涉及標記抗體的免疫復(fù)合物，并使供體熒光團靠近受體，從而產(chǎn)生 FRET 信號。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 2 板檢測方案

2 板協(xié)議涉及在裂解前在 96 孔板中培養(yǎng)細胞，然后將裂解物轉(zhuǎn)移到 384 孔低體積檢測板，然后添加磷酸組蛋白 H3 (Ser10) HTRF 檢測試劑。該協(xié)議使細胞的生存能力和匯合度得到監(jiān)測。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 1 板測定方案

使用 HTRF 試劑檢測磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 可以在用于培養(yǎng)、刺激和裂解的單個板中進行。無需洗滌步驟。這種 HTS 設(shè)計的協(xié)議可實現(xiàn)小型化，同時保持穩(wěn)健的 HTRF 質(zhì)量。

HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測與蛋白質(zhì)印跡法的比較

將指數(shù)生長的 Hela 細胞培養(yǎng)至 80% 匯合度，并用諾考達唑處理 16 小時。培養(yǎng)基去除和裂解后，通過離心收集可溶性上清液。等量的裂解物用于 WB 和 HTRF 的并排比較。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。使用 HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10)，僅 256 個細胞就足以進行最小信號檢測，而 Western Blot 信號則需要 6,400 個細胞。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為細胞增殖的有絲分裂生物標志物

將 Hela 和 A431 細胞接種在 96 孔板中，并用 Nocodazole 處理 16 小時，Nocodazole 是一種抗有絲分裂劑，可解聚微管并在組蛋白 H3 Ser10 磷酸化達到最大時阻斷細胞有絲分裂。去除細胞培養(yǎng)基后，加入 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解緩沖液孵育 30 分鐘。將 16 µl 的每種裂解物轉(zhuǎn)移到 384sv 白板上進行 HTRF 分析。將裂解體積增加至 200µl 可改善 HTRF 檢測信號的線性度。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為極光激酶 B 抑制的讀數(shù)

細胞周期中的磷酸組蛋白 H3-Ser10

總體組蛋白磷酸化在細胞周期期間波動非常顯著，其特征在于有絲分裂中絲氨酸 10 上組蛋白 H3 磷酸化的峰值。極光激酶 B 直接負責有絲分裂組蛋白 H3 Ser10 磷酸化。與 BORA 復(fù)合的 Aurora 激酶 A 負責在 G2 期初始激活 PLK1，導致在 G2/M 轉(zhuǎn)換檢查點激活細胞周期蛋白依賴性激酶 1 有絲分裂進入。極光激酶 A 在人類癌癥中經(jīng)常被擴增，極光激酶 A 在人類腫瘤中的過度表達與不良預(yù)后和基因組不穩(wěn)定相關(guān)。此外，極光激酶 B 的高表達水平與膠質(zhì)母細胞瘤、卵巢癌和肝細胞癌的不良預(yù)后相關(guān)。